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分子生物學常用溶液配制

發布者:艾美捷科技    發布時間:2021-05-24     
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一、分子生物學常用貯存液的配制


1.30%丙烯酰胺溶液

【配制方法】將 29g 丙烯酰胺和 1g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為 60ml的水中。加熱至 37℃溶解之,補加水至終體積為 100ml。用濾器(0.45μm 孔徑)過濾除菌,查證該溶液的 pH 值應不大于 7.0,置棕色瓶中保存于室溫。


【注意】丙烯酰胺具有很強的神經毒性并可以通過皮膚吸收,其作用具累積性。稱量丙烯酰胺和亞甲雙丙烯酰胺時應戴手套和面具??烧J為聚丙烯酰胺無毒,但也應謹慎操作,因為它還可能會含有少量未聚合材料。一些價格較低的丙烯酰胺和雙丙烯酰胺通常含有一些金屬離子,在丙烯酰胺貯存液中加入大約 0.2 體積的單床混合樹脂(MB-1Mallinckrodt),攪拌過夜,然后用 Whatman 1 號濾紙過濾以純化之。在貯存期間,丙烯酰胺和雙丙烯酰胺會緩慢轉化成丙烯酰和雙丙烯酸。


 2.40%丙烯酰胺

【配制方法】把380g 丙烯酰胺(DNA 測序級)和20g N,N’-亞甲雙丙烯酰胺溶于總體積為 600ml 的蒸餾水中。繼續按上述配制 30%丙烯酰胺溶液的方法處理,但加熱溶解后應以蒸餾水補足至終體積為 1L。


【注意】見上述配制 30%丙烯酰胺的說明,40%丙烯酰胺溶液用于 DNA 序列測定 。


3.放線菌素D溶液

【配制方法】把 20mg 放線菌素 D 溶解于 4ml 100%乙醇中,1:10 稀釋貯存液,用 100%乙醇作空白對照讀取 OD440 值。放線菌素 D(分子量為 1255)純品在水溶液中的摩爾消化系數為 21,900,故而 1mg/ml 的放線菌素 D 溶液在 440nm 處的吸光值為 0.182,放線菌素 D 的貯存液應放在包有箔片的試管中,保存于-20℃。


【注意】放線菌素 D 是致畸劑和致癌劑,配制該溶液時必須戴手套并在通風櫥內操作,而不能在開放在實驗桌面上進行,謹防吸入藥粉或讓其接觸到眼睛或皮膚。藥廠提供的作治療用途的放線菌素 D 制品常含有糖或鹽等添加劑。只要通過測量貯存液在 440nm 波長處的光吸收確定放線菌素 D 的濃度,這類制品便可用于抑制自身引導作用。


4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液

【配制方法】在 0.8ml 水中溶解 60mg ATP,用 0.1mol/L NaOH 調至 pH 值至 7.0,用蒸餾水定容 1ml,分裝成小份保存于-70℃


5.10mol/L乙酸酰溶液

【配制方法】把 770g 乙酸酰溶解于 800ml 水中,加水定容至 1L 后過濾除菌。


6.10%過硫酸銨溶液

【配制方法】把 1g 過硫酸銨溶解于終量為 10ml 的水溶液中,該溶液可在 4℃保存數周。


7.BCIP溶液

【配制方法】把 0.5g 的 5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二鈉鹽(BCIP)溶解于 10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于 4℃


8.2×BES緩沖鹽溶液

【配制方法】用總體積 90ml 的蒸餾水溶解 1.07g 鹽溶液 BES[N,N-雙(2-羥乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl 和 0.027g Na2HPO4,室溫下用 HCl 調節該溶液的pH 值至 6.96、然后加入蒸餾水定容至 100ml,用 0.22μm 濾器過濾除菌,分裝成小份,保存于-20℃。


9.1mol/LCaCl2溶液

【配制方法】在200ml 蒸餾水中溶解 54g CaCl2·6H2O,用0.22μm 濾器過濾除菌,分裝成 10ml 小份貯存于-20℃。


【注意】制備感受態細胞時,取出一小份解凍并用蒸餾水稀釋至 100ml,用 Nalgene濾器(0.45μm 孔徑)過濾除菌,然后驟冷至 0℃。


10.2.5mol/LCaCl222溶液

【配制方法】在 20ml 蒸餾水中溶解 13.5g CaCl2·6H2O,用 0.22μm 濾器過濾除菌 ,分裝成 1ml 小份貯存于-20℃。


11.1mol/L二硫蘇糖醇(DTT)溶液

【配制方法】用 20ml 0.01mol/L 乙酸鈉溶液(pH5.2)溶解 3.09g DTT,過濾除菌后分裝成 1ml 小份貯存于-20℃。


【注意】DTT 或含有 DTT 的溶液不能進行高壓處理。


12.脫氧核苷三磷酸(dNTP)溶液


【配制方法】把每一種 dNTP 溶解于水至濃度各為 100mmol/L 左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris 堿分別調節每一dNTP溶液的pH 值 7 .0(用 pH 試紙檢測 ),把中和后的每種 dNTP 溶液各取一份作適當稀釋,在下表中給出的波長下讀取光密度計算出每種 dNTP 的實際濃度,然后用水稀釋成終濃度為 50mmol/L 的dNTP,分裝成小份貯存于-70℃。比色杯光徑為 1cm 時,吸光度=εM


13.0.5mol/lEDTA(pH8.0)溶液

【配制方法】在800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二鈉(EDTA-Na·2H2O),在磁力攪拌器上劇烈攪拌,用 NaOH 調節溶液的 pH 值至 8.0(約需 20g NaOH顆粒)然后定容至 1L,分裝后高壓滅菌備用。


【注意】EDTA 二鈉鹽需加入 NaOH 將溶液的 pH 值調至接近 8.0,才能完全溶解。


14.溴化乙錠(10mg/ml溶液)


【配制方法】在 100ml 水中加入 1g 溴化乙錠,磁力攪拌數小時以確保其完全溶解,然后用鋁箔包裹容器或轉移至棕色瓶中,保存于室溫。


【注意】小心:溴化乙錠是強誘變劑并有中度毒性,使用含有這種染料的溶液時務必戴上手套,稱量染料時要戴面罩。


15.2×HEPES緩沖鹽溶液

【配制方法】用總量為 90ml 的蒸餾水溶解 1.6g NaCl、0.074g KCl、0.027gNa2PO4·2H2O、0.2g 葡聚糖和 1gHEPES,用 0.5mol/l NaOH 調節 pH 值至 7.05,再用蒸餾水定容至 100ml。用 0.22μm 濾器過濾除菌,分裝成 5ml 小份,貯存于-20℃。


16.IPTG溶液

【配制方法】IPTG 為異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(分子量為 238.3),在 8ml 蒸餾水中溶解 2g IPTG 后,用蒸餾水定容至 10ml,用 0.22μm 濾器過濾除菌,分裝成 1ml 小份貯存于-20℃。


17.1mol/L乙酸鎂溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 214.46g 四水乙酸鎂,用水定容至 1L 過濾除菌。


18.1mol/LMgCl2溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 203.4g MgCl2·6H2O,用水定容至 1L,分裝成小份并高壓滅菌備用。


【注意】MgCl2 極易潮解,應選購小瓶(如 100g)試劑,啟用新瓶后勿長期存放 。


19.β-巰基乙醇(BME)溶液

【配制方法】一般得到的是 14.4mol/L 溶液,應裝在棕色瓶中保存于 4℃。

【注意】BME 或含有 BME 的溶液不能高壓處理。


20.NBT溶液

【配制方法】把 0.5g 氯化氮藍四唑溶解于 10ml 70%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃。


21.酚/氯仿溶液

【配制方法】把酚和氯仿等體積混合后用 0.1mol/L Tris·HCl(pH7.6)抽提幾次以平衡這混合物,置棕色玻璃瓶中,上面覆蓋等體積的 0.01mol/l Tris·HCl(pH=7.6)液層,保存于 4℃。

【注意】酚腐蝕性很強,并可引起嚴重灼傷,操作時應戴手套及防護鏡,穿防護服。所有操作均應在化學通風櫥中進行。與酚接觸過的部位皮膚應用大量的水清洗,并用肥皂和水洗滌,忌用乙醇。


22.10mmol/L苯甲基磺酰氟(PMSF)溶液

【配制方法】用異丙醇溶解 PMSF 成 1.74mg/ml(10mmol/L),分裝成小份貯存于-20℃。如有必要可配成濃度高達 17.4mg/ml 的貯存液(100mmol/L)。

【注意】PMSF 嚴重損害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚,吸入、吞進或通過皮膚吸收后有致命危險。一旦眼睛或皮膚接觸了 PMSF,應立即用大量水沖洗之。凡被PMSF 污染的衣物應予丟棄。

PMSF 在水溶液中不穩定。應在使用前從貯存液中現用現加于裂解緩沖液中。PMSF 在水溶液中的活性喪失速率隨 pH 值的升高而加快,且 25℃的失活速率高于 4℃。pH 值為 8.0 時,20μmmol/l PMSF 水溶液的半壽期大約為 85min,這表明將 PMSF 溶液調節為堿性(pH>8.6)并在室溫放置數小時后,可安全地予以丟棄。


23.磷酸鹽緩沖溶液(PBS)溶液

【配制方法】在800ml 蒸餾水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4 和 0.24gKH2PO4,用 HCl 調節溶液的 pH 值至 7.4 加水定容至 1L,在 15lbf/in2(1034×105Pa)高壓下蒸氣滅菌 20min。保存于室溫。


24.1mol/L乙酸鉀(pH=7.5)溶液

【配制方法】將 9.82g 乙酸鉀溶解于 90ml 純水中,用 2mol/L 乙酸調節 pH 值至7.5 后加入純水定容到 1L,保存于-20℃。


25.乙酸鉀溶液(用于堿裂解)

【配制方法】在 60ml 5mol/L 乙酸鉀溶液中加入 11.5ml 冰乙酸和 28.5ml 水,即成鉀濃度為 3mol/L 而乙酸根濃度為 5mol/L 的溶液。


26.3mol/L乙酸鈉(pH5.2和pH7.0)溶液

【配制方法】在 80ml 水中溶解 408.1g 三水乙酸鈉,用冰乙酸調節 pH 值至 5.2或用稀乙酸調節 pH 值至 7.0,加水定容到 1L,分裝后高壓滅菌。


27.5mol/LNaCl溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 292.2g NaCl 加水定容至 1L,分裝后高壓滅菌。


28.10%十二烷基硫酸鈉(SDS)溶液

【配制方法】在 900ml 水中溶解 100g 電泳級 SDS,加熱至 68℃助溶,加入幾滴濃鹽酸調節溶液的 pH 值至 7.2,加水定容至 1L,分裝備用。

【注意】SDS 的微細晶粒易擴散,因此稱量時要戴面罩,稱量完畢后要清除殘留在稱量工作區和天平上的 SDS,10%SDS 溶液無須滅菌。


29.20×SSC溶液

【配制方法】在800ml 水中溶解 175.3g NaCl 和 88.2g 檸檬酸鈉,加入數滴 10mol/lNaOH 溶液調節 pH 值至 7.0,加水定容至 1L,分裝后高壓滅菌。


30.20×SSPE溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 17.5g NaCl、27.6g NaH2PO4·H2O 和 7.4g EDTA,用 NaOH 溶液調節 pH 值至 7.4(約需 6.5ml 10ml/L NaOH),加水定容至 1L,分裝后高壓滅菌。


31.100%三氯乙酸溶液

【配制方法】在裝有 500g TCA 的瓶中加入 227ml 水,形成的溶液含有 100%(M/V)TCA。


32.1mol/LTris溶液

【配制方法】在 800ml 水中溶解 121.91g Tris 堿,加入濃 HCl 調節 pH 值至所需值 。pHHCl7.4 70ml7.6 60ml8.0 42ml應使溶液冷至室溫后方可最后調定 pH 值,加水定容至 1L,分裝后高壓滅菌。


【注意】如 1mol/L 溶液呈現黃色,應予丟棄并置備質量更好的 Tris。盡管多種類型的電極均不能準確測量 Tris 溶液的 pH 值,但仍可向大多數廠商購得合適的電極。Tris 溶液的 pH 值因溫度而異,溫度每升高 1℃,pH 值大約降低 0.03 個單位。例如:0.05mol/L 的溶液在 5℃、25℃、和 37℃時的 pH 值分別為 9.5、8.9 和 8.6。


33.Tris緩沖鹽溶液(TBS)(25mmol/lTris)

【配制方法】在800ml 蒸餾水中溶解 8g NaCl、0.2g KCl 和 3g Tris 堿,加入 0.015g酚并用 HCl 調至 pH 值至 7.4,用蒸餾水定容至 1L,分裝后在151bf/in2(1.034×105Pa)高壓下蒸汽滅菌 20min,于室溫保存。


34.X-gal溶液

【配制方法】X-gal 為 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D 半乳糖苷。用二甲基甲酰胺溶解 X-gal 配制成的20mg/ml 的貯存液。保存于一玻璃管或聚丙烯管中,裝有 X-gal 溶液的試管須用鋁箔封裹以防因受光照而被破壞,并應貯存于-20℃。X-gal 溶液無須過濾除菌。


二、常用抗生素溶液

a:以乙醇為溶劑的抗生素溶液無須除菌處理。所有抗生素溶液均應放于不透光的容器保存。

b:鎂離子是四環素的拮抗劑,四環素抗性菌的篩選應使用不含鎂鹽的培養基(如LB 培養基)。


三、常用的電泳緩沖液


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